Suyak iligi ponksiyonu va biopsiya texnikasi-odam bo'lmagan primatlar: biopsiya ignasini qo'llashga e'tibor qaratish

Odam bo'lmagan{0}}primatlar (NHP) klinikadan oldingi gematologiya tadqiqotlari, o'zak hujayrali dorilarni ishlab chiqish, immun mexanizmlarini o'rganish va tarjima tibbiyotini o'rganish uchun asosiy eksperimental hayvonlardir. Yuqori{2}}sifat, past-kontaminatsiya va to'liq suyak iligi namunalari ishonchli eksperimental ma'lumotlarning asosi va asosidir. Suyak iligi ponksiyoni va yadro biopsiyasi inson bo'lmagan primatlar- uchun in vivo jonli ravishda suyak iligi namunalarini olishning eng asosiy usullari hisoblanadi. Oddiy venoz qon to'plashdan farqli o'laroq, bu texnologiya uzun suyaklar va tekis suyaklarning kortikal suyagiga kirib borish va medullar bo'shlig'idan malakali suyak iligi suyuqligi va suyak iligi yadro to'qimalarini olish uchun professional qattiq ichi bo'sh biopsiya ignalariga tayanadi. Butun operatsiya ishlash xususiyatlariga, modelga mos kelishiga va suyak iligi biopsiya ignalarining standartlashtirilgan qo'llanilishiga juda bog'liq. Yetuk hayvonlar tajribasi protokollari va adabiyot tajribasi bilan birgalikda ushbu maqola eksperimental tadqiqotchilar uchun standartlashtirilgan texnik yoʻriqnomani taʼminlash uchun maxsus biopsiya ignalarini tanlash xususiyatlari, qoʻllash afzalliklari va standartlashtirilgan operatsiya asoslariga eʼtibor qaratib, NHP suyak iligi ponksiyoni va biopsiyasining toʻliq-jarayonining texnik tavsiflarini muntazam ravishda ishlab chiqadi.

Inson bo'lmagan primatlarda suyak iligi ponksiyoni va biopsiyaning asosiy texnik printsipi{0}}klassik itlarning suyak iligi namunalarini olish tizimiga mos keladi (Crow va boshq., 2009). Asosiy mantiq - qattiq kortikal suyak to'sig'ini yorib o'tish uchun qattiq ichi bo'sh biopsiya ignalaridan foydalanish, medullar bo'shlig'ini aniq aniqlash va salbiy bosim aspiratsiyasi va aylanma kesish orqali suyak iligi suyuqligi va qattiq yadro namunalarini olish. NHPlarning anatomik xususiyatlariga ko'ra, umumiy namuna olish joylari old va orqa oyoqlarga bo'linadi. Orqa oyoq-qo'llarning ustuvor namuna olish joylari orasida ko'pchilik o'rta va katta{7}}o'lchamdagi primat modellari uchun mos keladigan yonbosh suyagi va son suyagi trokanterik chuqurchalari kiradi (Wolf & White, 2012); old oyoq muqobil joyi - bu sayoz anatomik joylashuvi va qulay ishlashi, qo'shimcha namuna olish va takroriy namuna olish tajribalari uchun mos bo'lgan katta tüberkül. Namuna olishning turli joylarida suyak qalinligi, medullar bo'shlig'i diametri va yumshoq to'qimalarning qoplamasi bo'yicha farqlar mavjud bo'lib, ular namuna olish samaradorligi va namuna sifatini ta'minlash uchun suyak iligi biopsiya ignalarining tegishli xususiyatlariga mos kelishi kerak.

Suyakning invaziv operatsiyasi sifatida NHP suyak iligi ponksiyoni va biopsiyasi aniq to'qimalarni stimulyatsiya qilish va og'riq reaktsiyasini keltirib chiqaradi. Hayvonlarning farovonligini va barqaror eksperimental ishlashini ta'minlash uchun barcha namuna olish operatsiyalari standartlashtirilgan behushlik ostida bajarilishi kerak. Tadqiqotchilar eksperimental tsikl, namuna olish chastotasi va hayvonlarning individual holatiga ko'ra umumiy behushlik yoki lokal maqsadli behushlikni tanlashi mumkin, shunda operatsiyadan keyingi va operatsiyadan keyingi etarli analjeziyaga erishiladi. Bundan tashqari, butun jarayon steril eksperimental spetsifikatsiyalarga qat'iy rioya qilishi kerak, shu jumladan operatsiyadan oldin sochingizni olish va terini terini tayyorlash, povidon-yod va spirt bilan ko'p standart dezinfeksiya qilish, steril sochiqni yotqizish, steril qo'lqoplar va jarrohlik asboblarini kiyish, operatsiyadan keyingi mahalliy infektsiyalar va boshqa komplikatsiyalarga ta'sir qiladi. takroriy tajribalar.

Maxsus suyak iligi biopsiya ignalarining tasnifi, tanlash va ishlash afzalliklari

Suyak iligi biopsiya ignasi NHP suyak iligi namunasini olishning asosiy aniq asbobidir, u bir martalik teshilishning muvaffaqiyat darajasini, namunaning yaxlitligini va periferik qonning ifloslanish darajasini aniqlaydi. Hozirgi vaqtda eksperimental hayvonlar uchun suyak iligi namunalarini olish uchun maxsus ignalarning ko'plab etuk savdo modellari mavjud, ular orasida Rosenthal, Klima, Illinoys sternum / yonbosh ignasi va Jamshidi ignasi mavjud. Har bir model igna uzunligi, o'lchov diametri, ichki yadro tuzilishi va qo'lda tutqich bo'yicha farqlangan dizaynga ega bo'lib, hayvonlarning turli tana turlariga, suyak anatomik xususiyatlariga va eksperimental namuna olish maqsadlariga moslashadi.

Barcha igna turlari orasida14G Jamshidi suyak iligi biopsiya ignasiNHP suyak iligi yadro biopsiyasi uchun oltin standart bo'lib, bu eksperimental operatsiyalar uchun eng tavsiya etilgan spetsifikatsiyadir. Ushbu turdagi biopsiya ignasi moslashtirilgan markaziy qattiq stilet bilan optimallashtirilgan qattiq ichi bo'sh strukturani qabul qiladi. Igna tanasi o'rtacha qattiqlik va qattiqlikka ega, bu primatlarning kortikal suyagiga egilmasdan yoki sirpanmasdan samarali kirib borishi mumkin. Igna uchidagi spiral kesuvchi qirrasi suyak iligi yadrosining to'liq to'qimalarini barqaror ravishda singdirishi va ushlab turishi mumkin, bu esa professional bo'lmagan igna turlaridan kelib chiqadigan namunaning parchalanishi va to'qimalarning ekstruziyasi shikastlanishiga yo'l qo'ymaydi. Yupqa{4}}oʻlchovli aspiratsion ignalar bilan solishtirganda, 14G Jamshidi biopsiya ignasi kattaroq ichki boʻshliq diametriga ega boʻlib, u xavfsizlikni taʼminlash, morfologik aniqlash, toʻqimalarni kesish va yadro biopsiyasining eksperimental indeks tahlili ehtiyojlarini qondirish bilan birga yetarli{6}}hajmli yadro namunalarini olishi mumkin. Katta o'lchamdagi qalin ignalar bilan solishtirganda, u ortiqcha suyak shikastlanishi va intraoperatif qon ketishini samarali ravishda kamaytiradi, namuna sifatini va hayvonlarning takrorlanadigan ishlatilishini muvozanatlashtiradi.

Barcha maxsus suyak iligi biopsiya ignalari mos keladigan markaziy stilet bilan ishlab chiqilgan bo'lib, bu oddiy in'ektsiya ignalaridan farq qiluvchi asosiy tarkibiy xususiyatdir. Stile ponksiyon paytida igna tanasining bo'sh bo'shlig'ini to'liq to'sib qo'yishi mumkin, terining yumshoq to'qimalari va suyak qoldiqlari quvur liniyasini to'sib qo'yish uchun igna bo'shlig'iga kirishiga yo'l qo'ymaydi va keyingi salbiy bosim aspiratsiyasi va yadro to'qimasini kesishning silliq rivojlanishini ta'minlaydi. Takroriy namuna olish tajribalarida tadqiqotchilar hayvonlarning tana vazni va suyak hajmiga qarab igna spetsifikatsiyalarini tanlashlari kerak: kichik primatlar uchun (tana vazni 5 kg dan kam) qisqa va nozik-oʻlchovli biopsiya ignalari va oʻrta va katta shaxslar uchun anʼanaviy 14G oʻrtacha uzunlikdagi Jamshidi ignalari, asbob-uskunalar va eksperimental obʼyektlarning aniq moslashuvini amalga oshiradi.

Biopsiya igna namunalarini olish uchun operatsiyadan oldingi asosiy ehtiyot choralari

Namuna koagulyatsiyasi, gemoliz va ifloslanishining oldini olish va tajriba namunalarining malakali tezligini yaxshilash uchun namuna olishdan oldin biopsiya ignalari uchun standartlashtirilgan dastlabki ishlov berish va operatsiya spetsifikatsiyalari amalga oshirilishi kerak. Birinchidan,geparin antikoagulyatsion igna va shpritslarni oldindan davolashmajburiy hisoblanadi. Ishlatishdan oldin, biopsiya ignasi va mos keladigan shpritsning ichki devorini yuvish uchun oz miqdorda geparin eritmasini chiqarib oling va qoldiq suyuqlikni to'liq bo'shatib, igna bo'shlig'ining ichki devorida bir xil geparin antikoagulyant qoplama hosil qiling. Ushbu operatsiya namuna olingandan keyin suyak iligi suyuqligining tez koagulyatsiyasini samarali oldini oladi, smear tayyorlash va namuna koagulyatsiyasi natijasida hujayralarni aniqlashda muvaffaqiyatsizlikka yo'l qo'ymaydi va suyak iligi suyuqligining yuqori sifatli-olishini dastlabki davolash bosqichidir.

Ikkinchidan, uzoq-muddatli takroriy hayvonlardan namuna olish tajribalari uchun,ponksiyon joylarini aylanma tanlashKortikal suyak giperplaziyasiga, mahalliy to'qimalarning yopishishiga va ponksiyon qarshiligining kuchayishiga olib kelishi mumkin bo'lgan, natijada namuna olishning buzilishi va hayvonlarning shikastlanishi kuchayishi mumkin bo'lgan bir joyda takroriy ponksiyonning oldini olish uchun qabul qilinishi kerak. Og'riqsizlantirish sxemasi nuqtai nazaridan, ponksiyon joyining teriga va chuqur yumshoq to'qimalariga mahalliy og'riq qoldiruvchi in'ektsiya oddiy umumiy behushlikdan ustundir, bu operatsiyadan keyingi yaraning og'rig'i va noqulayligini samarali ravishda engillashtiradi, hayvonlarning stressga javobini kamaytiradi va operatsiyadan keyingi tiklanish va keyingi takroriy tajribalarni osonlashtiradi.

Namuna olish hajmini nazorat qilish nuqtai nazaridan, biopsiya ignasining igna bo'shlig'i sig'imi va eksperimental hayvonlarning fiziologik qon hajmi bilan cheklangan, bitta ponksiyon joyidan namuna olish hajmi 2 ml dan oshmasligi kerak. Haddan tashqari ekstraktsiya periferik qonni jiddiy suyultirishga olib keladi, namunadagi yadroli hujayralar va faol suyak iligi to'qimalarining ulushini kamaytiradi, eksperimental aniqlash natijalariga xalaqit beradi va gematologik indeks tahlili va to'qimalarni morfologik kuzatishning aniqligiga ta'sir qiladi.

Iliak po'stlog'ining ponksiyoni uchun standart operatsiya tartibi (yadro biopsiya ignasi operatsiyasi)

Iliak cho'qqisi --odam bo'lmagan primat suyak iligi biopsiyasi uchun eng an'anaviy va afzal qilingan namuna olish joyi bo'lib, qalin kortikal suyak, boy medullar bo'shlig'i va bir nechta qo'shni muhim organlarga ega bo'lib, yuqori xavfsizlik va yuqori namuna olish darajasiga ega. Hayvon to'liq behushlik qilgandan so'ng, uni moyil holatga qo'ying, son suyagini ko'tarish uchun ikkala pastki oyoq-qo'llarini qorin ostiga buklang va yonbosh suyagini to'liq ochib qo'ying. Odam bo'lmagan{3}}ko'pchilik primatlarning yonbosh suyagida siyrak sochlari bor, buning uchun oddiygina soqol olish va terini tayyorlash kifoya. Teri navbatma-navbat povidon-yod va alkogol bilan dezinfektsiya qilinadi va jarrohlik maydonini izolyatsiya qilish va steril operatsiyani ta'minlash uchun steril teshik sochiq yotqiziladi.

Palpatsiya yo'li bilan yonbosh suyagi chegarasini tasdiqlagandan so'ng, penetratsiya paytida biopsiya ignasining ishqalanish qarshiligini kamaytirish uchun yonbosh suyagining old tomonida steril jarrohlik pichog'i bilan mayda teri kesmasini qiling. 14G Jamshidi biopsiya ignasini kesma bilan tekislang, asta-sekin yonbosh suyagining oldingi dorsal chetiga o'ting, igna tanasini doimo yonbosh suyagi tekisligiga perpendikulyar holda ushlab turing va igna tanasini soat yo'nalishi bo'yicha aylantirganda doimiy va barqaror pastga bosim o'tkazing. Vertikal igna qo'yish holati muvaffaqiyatli biopsiyaning kalitidir, bu igna uchi medullar bo'shlig'iga to'g'ri kirib borishini ta'minlaydi, kortikal suyakning bo'linishi va qo'shni to'qimalarning shikastlanishiga olib keladigan qiya penetratsiyani oldini oladi va biopsiya igna uchini kesish va namuna olish samaradorligini maksimal darajada oshiradi.

Igna tanasi kortikal suyakka kirganda, operator penetratsiya qarshiligining keskin pasayishini sezadi va biopsiya ignasi suyak to'qimalariga silkitmasdan barqaror o'rnatilishi mumkin, bu igna uchi medullar bo'shlig'iga muvaffaqiyatli kirganligini ko'rsatadi. Bu vaqtda markaziy stiletni to'liq chiqarib oling, 10 ml steril shpritsni biopsiya ignasi dumiga ulang va pistonni tortib, barqaror salbiy bosim o'tkazing. Yangi primat suyak iligi to'q qizil va ko'pikli bo'lib, periferik qonga qaraganda yuqori yopishqoqlikka ega bo'lib, suyak iligi namunasi bo'lgan mayda och{3}}rangli trabekulyar suyak to'qimasini o'z ichiga oladi.

Agar suyak iligi suyuqligi olinmasa, igna tanasini ko'r-ko'rona tortib olmang. Igna uchini kesish va namuna olish diapazonini sozlash uchun biopsiya ignasini 90-180 daraja aylantiring; Agar hali ham yaroqsiz bo'lsa, stiletni qayta joylashtiring, igna tanasining chuqurligini oldinga yoki orqaga biroz sozlang va yana salbiy bosim o'tkazing. Diagnostik eksperimental namunalar uchun namunaning tozaligini ta'minlash uchun bitta uchastkaning namuna olish hajmi 1 ml ichida nazorat qilinadi; agar tajribalar uchun suyak iligi namunalarining katta hajmi talab etilsa, bitta joyda ortiqcha ekstraktsiya o'rniga namuna olish uchun bir nechta ponksiyon joylari tanlanadi. Namuna olingandan so'ng, biopsiya ignasini tezda tortib oling, ponksiyon joyida uzoq vaqt davomida to'g'ridan-to'g'ri siqish gemostazini qo'llang va agar doimiy qon ketish sodir bo'lsa, terini bir ipli tikuv bilan tikib qo'ying.

Femoral trokanterik chuqurcha va son suyagi proksimal uchining ponksiyon va biopsiya operatsiyasi

Femoral trokanterik chuqurchalar (tana og'irligi) odam bo'lmagan{0}}kichik primatlar uchun ideal qo'shimcha namuna olish joyidir.<5kg). The local bone structure is shallow, and the medullary cavity is concentrated, which is convenient for the positioning and penetration of fine-gauge biopsy needles. However, the proximal thigh muscle layer of large primates is thick, resulting in large puncture resistance and difficult operation. The core operation principle is consistent with iliac crest biopsy: place the animal in lateral position, hold the proximal thigh with the palm, locate the trochanteric fossa at the inner and distal side of the femoral greater trochanter by thumb palpation, insert the biopsy needle toward the femoral shaft to penetrate into the medullary cavity, and complete negative pressure aspiration and specimen collection according to the standard needle operation procedure.

Proksimal humerus yana bir samarali muqobil namuna olish joyidir. Ichak suyagining diametri kattaroq, medullar bo'shlig'i kengroq va sayozroq bo'lib, biopsiya ignasi joylashishini aniqroq va operatsiyani soddalashtiradi. Hayvonni lateral holatga qo'ying, old oyoqning proksimal qismini ushlab turing, sonning katta va kichik tuberkullari orasidagi tuberkulyar bo'shliqni paypaslang, biopsiya ignasini son suyagi bo'shlig'iga kiriting. Ushbu sayt igna tanasining aniqligi uchun past talablarga ega, ponksiyonning past darajasi va tez namuna olish va hayvonlarning ommaviy tajribalari uchun javob beradi.

Uzun suyak perfuziyasi usuli va asosiy biopsiya ignasi-chuqur qoʻllanilishi

An'anaviy bitta igna ponksiyonidan farqli{0}}, uzun suyak perfuziyasi usuli (Kushida va boshq., 2000) suyak iligi biopsiyasi uchun ikkita ignadan hamkorlikda foydalanishni talab qiladigan yuqori aniqlikdagi tajribalar uchun mos bo'lgan yuqori-suyak iligi namunalarini olish texnologiyasidir. Operatsiya uchun mos ravishda uzun suyak milining ikkala uchidagi medullar bo'shlig'iga mos keladigan biopsiya ignalarini kiritish, bir biopsiya ignasi orqali sekin steril normal fiziologik eritmani yuborish va suyak iligi{6}}tarkibida perfuzat bo'lgan suyak iligini boshqa ignaga ulangan uzatma trubkasi orqali steril yopiq idishga yig'ish kerak. Ikkita igna bilan birgalikda namuna olish usuli anʼanaviy ponksiyonda periferik qonning ifloslanishini samarali oldini oladi va olingan suyak iligi namunalari yuqori tozalikka ega boʻlib, ildiz hujayralarini ajratish, in vitro madaniyati va yuqori-aniqlikdagi omikani aniqlash tajribalari uchun mos keladi.

Biopsiya ignalari asosida suyak iligi aspiratsiyasi va yadro biopsiyasining differentsial operatsiyasi

Suyak iligi aspiratsiyasi va yadro biopsiyasi bir xil namuna olish joyi va biopsiya igna uskunasini o'rtoqlashadi, ammo operatsiyadan keyingi igna operatsiya mantig'i butunlay boshqacha bo'lib, bu ikki turdagi eksperimental namunalarni aniqlaydi: suyuq suyak iligi suyuqligi va qattiq suyak iligi yadrosi to'qimasi. Insuyak iligi aspiratsiyasi, biopsiya ignasi medullar bo'shlig'iga o'rnatilgandan so'ng, stiletni tortib oling va hujayralarni hisoblash, smear morfologiyasi va oqim sitometriyasini aniqlash uchun ishlatiladigan suyuq suyak iligi suyuqligini olish uchun salbiy bosim o'tkazish uchun shpritsni ulang.

Insuyak iligi yadro biopsiyasito'qima namunalariga e'tibor qaratib, stiletni tortib olgandan so'ng, Jamshidi biopsiya ignasi barqaror bosim va sekin aylanish orqali medullar bo'shlig'iga 1-2 sm kengaytiriladi. Igna uchidagi spiral kesish qirrasi suyak iligi yadro to'qimasini to'liq o'rashi mumkin. Keyin igna tanasini aylantirish va tebranish orqali bo'shating, yadro to'qimalarining pastki qismini suyak trabekulasidan ajratish uchun biroz orqaga torting va qayta kiriting. To'qimalarning to'liq ajratilganligini tasdiqlaganingizdan so'ng, biopsiya ignasini aylanma tortish orqali yaxlit holda tortib oling. Nihoyat, buzilmagan qattiq suyak iligi yadrosi namunasini chiziqli itargich bilan igna bo'shlig'idan chiqarib oling va to'qimalarni kesish va patologik tahlil qilish uchun uni 10% formalin bilan mahkamlang.

Xulosa

Suyak iligi biopsiya ignalarining standartlashtirilgan qoʻllanilishi,{0}}odam boʻlmagan primat suyak iligi ponksiyoni va biopsiya tajribalarining muvaffaqiyatining asosiy kalitidir. 14G Jamshidi biopsiya ignasi optimallashtirilgan strukturaviy dizayni va barqaror namuna olish ko'rsatkichi bilan NHP yadro biopsiyasi uchun afzal qilingan uskuna hisoblanadi. Tadqiqotchilar hayvonlarning tanasi turiga va eksperimental maqsadlarga ko'ra igna spetsifikatsiyalarini tanlashlari, geparinni oldindan davolash, steril operatsiya va saytni aylantirish protokollarini qat'iy bajarishlari va aspiratsiya va yadro biopsiyasining differentsial operatsiya usullarini o'zlashtirishlari kerak. Standartlashtirilgan igna tanlash va ishlatish namunaning tozaligi va yaxlitligini samarali yaxshilashi, hayvonlarning shikastlanishi va eksperimental xatolarni kamaytirishi, shuningdek, odamdan tashqari{5}}primat modellari asosida klinikadan oldingi gematologiya va translatsion tibbiyot tadqiqotlari uchun mustahkam texnik yordam berishi mumkin.